DNA Marker產(chǎn)品選擇指南
DNA Marker產(chǎn)品選擇指南 | 時(shí)間: December-16 12:50:33 | 分類(lèi):技術(shù)欄目
凌儀生物提供高速離心機(jī)，美國(guó)Bio-rad伯樂(lè)電泳，德國(guó)eppendorf艾本德移液器，美國(guó)ABI基因擴(kuò)增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，以及Corning康寧，Axygen愛(ài)思進(jìn)，Greiner格瑞拉等耗材要省錢(qián)，別錯(cuò)過(guò)哦。1.Marker選擇標(biāo)準(zhǔn)
（1）應(yīng)選擇在目標(biāo)片段大小附近ladder較密的marker，這樣對(duì)目標(biāo)片段大小的估計(jì)較準(zhǔn)確。
（2）所選marker應(yīng)能清楚反映目標(biāo)片段的大小，且次要片段大小也能反映出來(lái)。如作酶切鑒定時(shí)，目的片段和切后載體片段較好能在同一個(gè)marker中反映出來(lái)，若二者不能兼顧，將前者作為主要考慮要素。
2.常見(jiàn)問(wèn)題分析
Q：為什么marker條帶非常模糊，無(wú)法辨別具體條帶？
A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個(gè)原因：1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請(qǐng)確保在使用過(guò)程中避免核酸酶污染；2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；3. 電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過(guò)20V/cm，溫度應(yīng)低于
Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？
A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個(gè)原因有關(guān)：1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；2. 電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過(guò)20V/cm，電壓太高可能也會(huì)導(dǎo)致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時(shí)凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致該現(xiàn)象出現(xiàn)。
Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒(méi)有條帶？
A：出現(xiàn)上述情況可能是：1. marker上樣量較低，可適當(dāng)增加上樣量；2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致電泳條帶弱或根本沒(méi)有條帶；3. 電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增加凝膠濃度。
Q：為什么marker缺帶？
A：對(duì)于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因?yàn)椋?/span>1. 小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認(rèn)所致，可適當(dāng)縮短電泳時(shí)間，降低電壓，同時(shí)增加凝膠濃度；2. 凝膠中EB含量過(guò)低，導(dǎo)致大片段結(jié)合EB量太少或沒(méi)有，在紫外光下亮度太低，可適當(dāng)增加EB用量。
