美國(guó)伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟
美國(guó)伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟 | 時(shí)間: March-23 20:38:42 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物提供高速離心機(jī)，美國(guó)Bio-rad伯樂(lè)電泳，德國(guó)eppendorf艾本德移液器，美國(guó)ABI基因擴(kuò)增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，以及Corning康寧，Axygen愛(ài)思進(jìn)，Greiner格瑞拉等耗材要省錢(qián)，別錯(cuò)過(guò)哦。 伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽可快速、高質(zhì)量地轉(zhuǎn)印小型凝膠。作為Mini-PROTEAN 3 電泳系統(tǒng)的一個(gè)組件，伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽能容納2 個(gè)凝膠支架轉(zhuǎn)印夾，用于在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內(nèi)電轉(zhuǎn)印兩種小凝膠（Mini-PROTEAN 3 凝膠和ReadyGel 預(yù)制膠）。
伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽特點(diǎn)包括：
1.1小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)印2 塊7.5 x
2.電極絲相距
3.顏色標(biāo)記的轉(zhuǎn)印夾和電極，確保轉(zhuǎn)印過(guò)程中凝膠 的正確定向
4.內(nèi)置bio-rad冷卻裝置，快速吸收轉(zhuǎn)移過(guò)程中產(chǎn)生 的熱量
5.既可作為完整的獨(dú)立設(shè)備，又可作為一個(gè)模塊與 Mini-PROTEAN 3 轉(zhuǎn)印槽的緩沖液槽和蓋兼容
伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽使用方法步驟：
全程請(qǐng)戴手套操作，以免污染伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽！
1）電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉(zhuǎn)印緩沖液中，洗2~3 次，每次10min.
2）取出伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽，先小心放一攪拌子在底部，再倒一半轉(zhuǎn)印緩沖液。
3）取轉(zhuǎn)印紙切成約如膠片大小，先在方形培養(yǎng)皿中以少許甲醇浸濕數(shù)秒鐘，再置入伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽中的緩沖液10 min 后使用。 另取兩張濾紙，以及兩片方形海綿墊，都放在伯樂(lè)轉(zhuǎn)印槽的緩沖液中備用。
4）取出轉(zhuǎn)印夾打開(kāi)平放，先墊一張方形海棉墊，鋪上一張濕濾紙，小心平鋪SDS-PAGE膠上去，然后小心迭上已潤(rùn)濕的轉(zhuǎn)印紙，用涂菌玻璃棒趕出氣泡；轉(zhuǎn)印紙?jiān)俚紊蠑?shù)滴緩沖液后，加蓋一層濾紙，及另一張海綿，也都不可陷入氣泡，即可把整個(gè)轉(zhuǎn)印三明治卡夾裝好。
膠迭到轉(zhuǎn)印紙時(shí)，較好一次成功，不要重作，否則蛋白質(zhì)色帶可能會(huì)印上去，較后產(chǎn)生重迭影像。
5）將轉(zhuǎn)印三明治置入已經(jīng)放有一半轉(zhuǎn)印緩沖液的伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽中，注意有轉(zhuǎn)印紙的那一面向正極（紅色），膠片那面向負(fù)極（黑色）。
6）當(dāng)三明治都放入伯樂(lè)bio-rad轉(zhuǎn)印槽后，以轉(zhuǎn)印緩沖液蓋滿所有的三明治，小心動(dòng)一動(dòng)卡夾，除去附在卡夾內(nèi)外的氣泡，蓋上蓋子，放到一攪拌器上，打開(kāi)攪拌器開(kāi)始攪拌，同時(shí)接好電源，裝置完成后放置10 min.
7）以300mA開(kāi)始轉(zhuǎn)印，溫度會(huì)漸漸上升，轉(zhuǎn)印1.5 h左右 后中止轉(zhuǎn)印，取出轉(zhuǎn)印三明治，打開(kāi)后依次取出轉(zhuǎn)印紙及膠。
具體轉(zhuǎn)印條件要根據(jù)蛋白的大小進(jìn)行優(yōu)化，注意低溫。
8）轉(zhuǎn)印后的膠片可以繼續(xù)進(jìn)行染色，看有無(wú)蛋白質(zhì)殘留。若電泳時(shí)加有藍(lán)色標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)marker（SeeBlue），則可在轉(zhuǎn)印紙上看到藍(lán)色的色帶，確定轉(zhuǎn)印成功，并可評(píng)估轉(zhuǎn)印效率。
