western blot電泳的膠怎么放平

western blot電泳的膠怎么放平 | 時(shí)間: April-9 9:50:48 | 分類:技術(shù)欄目

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近期實(shí)驗(yàn)室western blot電泳的膠做出來(lái)不夠平整，仔細(xì)思考一下實(shí)驗(yàn)步驟，總結(jié)有一下幾個(gè)方面原因供大家參考

1)實(shí)驗(yàn)用的玻璃板必須洗干凈

　　2)過(guò)硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量較多時(shí)，凝膠凝固過(guò)快也會(huì)膠不平，較多按照分子克隆加倍

　　3)加完試劑以后沒(méi)有很好的搖勻，導(dǎo)致有些部位的聚合劑濃度過(guò)高，聚合相對(duì)較快造成膠不平；

　　4)稍微注意手法，均勻加入

　　5)灌膠后應(yīng)該用水或者正丁醇?jí)耗z面或用20%的乙醇封頂(沒(méi)有毒性可以除氣泡，使用效果極好）。

　　6)邊緣膠是不容易聚合完全的，灌完膠后要立即加無(wú)水正丁醇覆蓋，濃度越低的膠越不要使用雙蒸水壓頂，另外還可以在壓頂試劑如正丁醇中添加少許AP來(lái)增加邊緣膠的凝聚強(qiáng)度

　　7)溫度也是影響膠聚合的重要因素，有些同事為了讓膠更快的凝固而把膠放到50度的溫箱，由于受熱不均勻，造成膠聚合不均勻。