大腸桿菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)的注意點(diǎn)
大腸桿菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)的注意點(diǎn) | 時(shí)間: May-21 15:30:57 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物提供高速離心機(jī)，美國(guó)Bio-rad伯樂(lè)電泳，德國(guó)eppendorf艾本德移液器，美國(guó)ABI基因擴(kuò)增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，以及Corning康寧，Axygen愛(ài)思進(jìn)，Greiner格瑞拉等耗材要省錢，別錯(cuò)過(guò)哦。有時(shí)候第一天涂的轉(zhuǎn)化平板、次日早晨轉(zhuǎn)化子可能長(zhǎng)成的菌落比較大（1~2毫米以上，BL21就長(zhǎng)得快），下一步轉(zhuǎn)化子做質(zhì)粒鑒定。這個(gè)情況下可以直接挑取一塊菌苔（勿帶出培養(yǎng)基），50微升酚/氯仿懸浮菌體，放置兩分鐘，加40微升TE抽提，上層TE吸出后再氯仿抽提一次，吸取上層TE即是質(zhì)粒提取液。提取的質(zhì)?？梢灾苯佑糜陔娪竞兔盖小＿@樣操作，可以省去轉(zhuǎn)接液體試管的培養(yǎng)步驟，至少節(jié)省6~8小時(shí)的時(shí)間。但是，要在各步驟都控制得很好的情況下才能保證提取和酶切的效果，不同的實(shí)驗(yàn)室或者操作者未必能夠很方便地重復(fù)。
轉(zhuǎn)化時(shí)一定要做一個(gè)宿主菌的對(duì)照，即重組質(zhì)粒涂板后再用宿主菌涂響應(yīng)抗性的平板，以確定第二天長(zhǎng)出來(lái)的克隆是否正確，我當(dāng)時(shí)做了三次轉(zhuǎn)化之后才發(fā)現(xiàn)不成功竟然是由于BL21可以在Amp（+）的平板上面生長(zhǎng)。
