PCR的優(yōu)越性與局限性
PCR的優(yōu)越性與局限性 | 時(shí)間: September-15 12:59:15 | 分類:技術(shù)欄目
凌儀生物提供高速離心機(jī)，美國(guó)Bio-rad伯樂電泳，德國(guó)eppendorf艾本德移液器，美國(guó)ABI基因擴(kuò)增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機(jī)等實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，以及Corning康寧，Axygen愛思進(jìn)，Greiner格瑞拉等耗材要省錢，別錯(cuò)過哦。 聚合酶鏈反應(yīng)即PCR技術(shù)，因?yàn)槠鋵?duì)基因或特定核酸序列在短時(shí)間內(nèi)的極大的擴(kuò)增效率，已在感染性疾病、腫瘤、遺傳病、寄生蟲病、法醫(yī)學(xué)、動(dòng)植物和考古等的診斷和研究中得到了廣泛的應(yīng)用，并在某些方面幾乎是難以替代的。但是，像自然界的任何事物一樣，PCR也有其局限性，稍不注意，就很容易造成錯(cuò)誤的判斷。
感染性疾病由病原微生物引起，主要有病毒、細(xì)菌、衣原體、支原體和螺旋體等，在PCR出現(xiàn)以前，這些病原體通常采用培養(yǎng)、免疫學(xué)方法測(cè)定特異抗原抗體，核酸雜交等進(jìn)行臨床檢測(cè)，但這些方法對(duì)某些病原體要么難以進(jìn)行（如導(dǎo)致結(jié)核病的結(jié)核桿菌、引起性病的沙眼衣原體和誘發(fā)肝炎的乙肝丙肝病毒等的培養(yǎng)），要么難以判斷體內(nèi)的復(fù)制情況或檢測(cè)的靈敏度不夠（如乙肝丙肝病毒和人免疫缺陷病毒等的抗原抗體檢測(cè)及核酸雜交檢測(cè)等）。PCR的出現(xiàn)，可以說從根本 上改變了這一點(diǎn)，其極高的檢測(cè)靈敏度和特異性，使難培養(yǎng)病原體的檢測(cè)變得迅捷而又準(zhǔn)確。各種定量PCR模式的出現(xiàn)，又使其抗病毒療效的判斷可以很客觀地從病毒核酸的量上反映出來。并且，PCR用于病原體感染的血液篩查，可以檢出抗原抗體尚未出現(xiàn)的“窗口期”內(nèi)的感染，從而避免經(jīng)輸血引發(fā)的感染性疾病的傳播。
遺傳基因的異?？芍逻z傳病的發(fā)生，人類遺傳病約有3000多種，患者占總?cè)丝跀?shù)的10％。遺傳病一般可分為單基因、多基因及染色體遺傳病。這些遺傳病通常是由于基因突變、基因缺失、染色體錯(cuò)位所致。以前常用的診斷方法有家系譜分析、染色體檢查（特別是顯帶法）、生物化分析等?，F(xiàn)PCR技術(shù)由于其對(duì)基因體外擴(kuò)增快速靈敏的特點(diǎn)，結(jié)合其他多種分子生物學(xué)手段可以檢出大部分已知的基因突變、基因缺失、染色體錯(cuò)位等，應(yīng)可成為遺傳病診斷的較有效、較可靠的方法之一。
法醫(yī)學(xué)也因?yàn)?/span>PCR技術(shù)的出現(xiàn)，進(jìn)入到了分子物證的時(shí)代，并可以精確到個(gè)體確認(rèn)水平，其在分子水平上對(duì)血斑、精斑、毛發(fā)、組織碎片乃至微量殘留細(xì)胞等法醫(yī)物證的確認(rèn)，遠(yuǎn)較以前的血清學(xué)方法確實(shí)可靠，如以前的血型鑒定，只能是排除不同血型者，而無法做到個(gè)體確認(rèn)。并且PCR因?yàn)槠錁O大的擴(kuò)增效率，可以對(duì)極少量物證，如一根毛發(fā)、一滴血液、極小精斑、體液中的脫落細(xì)胞等進(jìn)行分析，從而確定個(gè)體?？梢哉f，當(dāng)代法醫(yī)鑒定在個(gè)體鑒別上已離不開PCR技術(shù)。
眾所周知，腫瘤與遺傳有關(guān)，除已知的單基因遺傳腫瘤，如視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、腎母細(xì)胞瘤等以外，幾乎所有的腫瘤細(xì)胞中都可以觀察到原癌基因的重排，這些基因的變化常導(dǎo)致細(xì)胞增殖與凋亡失控，較終形成腫瘤。PCR擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)，使癌基因和抑癌基因及其狀態(tài)的檢測(cè)，變得簡(jiǎn)便、快捷而又容易。此外，使用反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)特定腫瘤抗原的mRNA，很容易監(jiān)測(cè)到癌轉(zhuǎn)移的發(fā)生。
PCR這種基因擴(kuò)增技術(shù)因其簡(jiǎn)單易行，應(yīng)用現(xiàn)已極為廣泛，但其影響因素很多，如標(biāo)本或核酸純化過程中出現(xiàn)的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物、擴(kuò)增儀孔間溫度的差異以及核酸提取中的隨機(jī)誤差，可造成假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。又如，以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染和核酸提取中標(biāo)本間的交叉污染，也很容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。因此，PCR臨床應(yīng)用必須要有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)室管理和質(zhì)量控制措施，只有在充分了解PCR測(cè)定的不確定性的基礎(chǔ)上，采取相應(yīng)質(zhì)控措施，才能確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，而不致出現(xiàn)重大判斷失誤。因?yàn)?/span>PCR擴(kuò)增，其得到極大的檢測(cè)靈敏度，但同時(shí)其對(duì)檢測(cè)中的錯(cuò)誤也有極大的放大作用。因此，對(duì)于PCR檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告必須慎重，尤其是在該結(jié)果會(huì)產(chǎn)生重大后果的時(shí)候，如重大感染性疾病、遺傳病、法醫(yī)物證鑒定、親子鑒定等，必須在有相應(yīng)嚴(yán)格質(zhì)控措施（如內(nèi)質(zhì)控、陰性和陽性質(zhì)控）的情況下重復(fù)測(cè)定，才可以報(bào)告結(jié)果，并做出實(shí)事求是的解釋。
